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组织切片
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组织切片

组织切片

**组化实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡组织切片是制作组织标本比较常用的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有的影响,但可进行抗原修复,是**组化中比较好的组织标本制作方法。

组织切片流程:

1、取材 

2、固定  

3、脱水:30%--50%---70%(每步60分钟)---85%---95%----- (每步30分钟)。

4、透明:转入1/2二甲苯+1/2无水酒精混合液20ml透明1h,纯二甲苯20 ml透明1h,再用纯二甲苯20ml透明40min,并回收各液。

5、浸蜡:(1)将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中,每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行;

         (2)将材料放入溶解的纯蜡中,时间为30分钟,该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。

6、包埋 :(1)将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中,石蜡溶解后应过滤后使用,以免含杂质影响切片;

          (2)材料放入纸船,并摆好在蜡中的位置,如果包埋的组织块较多,应进行编号;

          (3)将纸船放置在冷水上加速冷却过程。 

7、切片  :(1)修整:用刀片修成方形或长方形蜡块; 

           (2)以少许热蜡液,将蜡块底部粘附于小木块上,以少许石蜡融化在蜡块边缘,加强粘附的强度;

           (3)木块粘附于切片机上,调整切片机,使蜡块切面与切片刀刃平行; 

           (4)切成连续的蜡带,切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量,可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度,也可             在冰箱中放置一段时间;          

           (5)分割蜡带,分开的蜡片放在45℃温水上,使蜡片展开。

8、粘片与烤片:

            (1)可用粘片剂防止蜡片滑脱,但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色,影响观察,实验表明,载玻片洗的足                够干净,一般不会滑片;  

            (2)用载玻片捞取展开后的蜡片,调整蜡片的位置使位于载玻片中央,自然干燥



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